Utprøving og validering av in-house prosedyre for påvisning av laktoseintoleranse ved bruk av real-time PCR

Abstract

Melk inneholder disakkaridet laktose, og skal man kunne nyttiggjøre seg laktose må det spaltes til glukose og galaktose av enzymet laktase. I spedbarnsalderen har de fleste et aktivt laktase enzym, for så å miste evnen til å bryte ned laktose i løpet av noen år. Man blir laktoseintolerant.

Laktoseintoleranse er minst utbredt i Nord- og Vest-Europa. Hos denne befolkningen er det ofte påvist en genmutasjon i en bestemt gensekvens som korrelerer med laktosetoleranse, og som er arvelig, autosomal og dominant.

Denne mutasjonen som også dette oppdragsarbeidet gjelder, befinner seg i genet Mini-Chromosome Maintenance 6 (MCM6) som ligger 13910 basepar oppstrøms for laktasegenet. Mutasjonen er en såkalt single-nukleotide polymorfisme (SNP) (C/T -13910), og det innebærer at et enkelt nukleotid er byttet ut med et annet. C/T indikerer at det dreier seg om nukleotidene C eller T. C koder for intoleranse og T for toleranse.

Sykehuset Østfold (SØ) ønsker å innføre en genotyping for påvisning av laktoseintoleranse. Dette oppdraget har resultert i en genotypingsmetode ved bruk av real-time PCR med påfølgende smeltepunktanalyse av C/T -13910. Resultatet på smeltepunktanalysen er avhengig av hvilken base C eller T som er i denne posisjonen, og baserekkefølgen til proben som fester seg til området -13910.